Organische Chemie

Formeln, Verbindungen, Reaktionen, Mechanismen, Versuche

• DNS-Analyse


(Seqenzierung)
Zunächst wird das Riesenmolekül der DNS enzymatisch in kleine Bruchstücke zerlegt.
Zur Analyse wird nun die sogenannte Ketten-abbruch-Methode verwendet:
das zu analysierende DNS-Bruchstück wird mit Hilfe von DNS-Polymerasen vervielfältigt.
Dabei werden als Substrate die vier dNTP-Nucleotide (dATP, dATTP, dGTP, dCTP) zugesetzt und zusätzlich noch in kleinen Mengen eines der vier ddNTP (Didesoxynuceotide).
Der Einbau dieser ddNTP-Bruchstücke in den Zweitstrang führt zum Kettenabbruch am 3'-Ende, da hier die veresterbare OH-Funktion fehlt.
Man führt vier getrennte Reaktionen mit jeweils einem der ddNTP durch, trägt die Produkte nebeneinander auf ein Trägermaterial auf und trennt sie mittels Gelelektrophorese, bei der die Bruchstücke entsprechend ihrer Länge wandern.